酶标仪

一一

酶标仪
是用酶标记抗原抗体化合物，然后通过底色对其染色，再通过分光光度计测试吸光度值判定物质浓度


酶标仪测定原理
酶标仪测定的原理是在特定波长下，检测待测物的吸光值。光通过被检测物，前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量，特定波长下，同一种被检测
物的浓度与被吸收的能量成定量关系。检测单位用 OD(optical  density 光密度)值表示，表示被检测物吸收掉的光密度。
溶液颜色的深浅与浓度之间的数量关系可以用吸收定律来描述，它是由朗伯定律和比尔定律组成的，故又称朗伯比尔定律。
当一束平行单色光照射到均匀非散射的溶液时，光的一部分透过溶液，一部分被溶液吸收，还有一部分被比色皿的表面所反射。设入射光的强度为 Io，
透射光的强度为 It，被溶液吸收光的强度为 Ia，反射光的强度为 Ir，则它们之间的关系如下：
I0=Ia+It+Ir       (2-1)
在实际分析时，实验所用的比色皿都是同材质同规格的，被比色皿表面反射光的强度就为一定值，因而不会引起误差，即反射光的影响可以忽略不计。则(2-1)式可简化为：
I0=Ia+It           (2-2)
当入射光的强度一定时，被溶液吸收的光的强度越大，透过溶液光的强度就越小，即透过溶液光的强弱仅与有色溶液对光的吸收有关。在实验分析中，
把透射光的强度占入射光的强度的百分比[(It/Io)%]称为透射比或透过率，用 T表示。T 越大，表明有色溶液的透光程度越大。吸光度 A 与透射比 T 关系如下：
A = −LgT      (2-3)
在酶标仪的数据测量中，将吸光度用 OD 值表示。OD 值可由下述公式计算：
OD=C*D*E    (2-4)
C：检测物溶液的浓度；
D：检测物溶液的厚度；
E：吸光系数。
(2-4)式说明：在入射光一定时，溶液的吸光度与溶液中有色物质的浓度及液层厚度的乘积成正比，此式就是朗伯比尔定律。此定律是比色分析和其他吸收光谱分析的理论基础。
由(2-4)式得出吸光系数：
E=OD/C*D    (2-5)
(2-5)式表示有色溶液在单位厚度和单位浓度时的吸光度。在温度、溶液的种类及入射光的波长都一定的条件下，E 为定值。E 值越大，说明比色分析时的灵敏度越高。
需要注意的是，在具体检测时，每一种物质都有其特定的波长，在此波长下，物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段，就会造成检测结果
的不准确。因此，在测定检测物时，我们选择特定的波长进行检测，这就称为测量波长。