色谱柱知识点4

一一

体积排阻色谱(size exclusion chromatography)
用化学惰性的具有不同孔径分布的多孔软质凝胶（如葡聚糖、琼脂糖）、半刚性凝胶（如苯乙烯-二乙烯基苯低交联度共聚物）或刚性凝胶（如苯乙烯-二乙烯基苯高交联度共聚物）作固定相，以水、四氢呋喃、邻二氯苯、N.N-二甲基甲酰胺作流动相，按固定相对样品中各组分分子体积阻滞作用的差别来实现分离，如图1-6所示。以亲水凝胶作固定相，以水溶液作流动相主体的体积排阻色谱法，称为凝胶过滤色谱(gel filtration chromatography)；以疏水凝胶作固定相,以有机溶剂作流动相的体积排阻色谱法，称为凝胶渗透色谱法(gel permeation chromatography)。
液液色谱法或称分配色谱法
是在20世纪40年代由Martin和Synge提出的，它的固定相是将一种极性或非极性固定液吸附载带在惰性固相载体上而构成的。它首先用于薄层色谱法，将固定液涂渍在硅胶G载体上。由于可涂渍固定液的种类繁多，因此它已发展成为能分离多种类型样品的方法，包括水溶性和油溶性样品、极性和非极性化合物、离子型和非离子型化合物等。
由于固定液是机械涂渍在载体上的，在流动相中会产生微量溶解，在高压流动相连续通过色谱柱的机械冲击下，固定液也会不断地流失，而流失的固定液又会污染已被分离开的组分，对色谱分离带来不良影响，这些又使液液色谱在HPLC中的应用受到限制，现已多被键合相色谱法取代。
硅羟基(硅醇基）

醇基-R-OH，羟基-OH
反相色谱柱：来源：中国药典（0512高效液相色谱法）以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶（C18）、辛烷基硅烷键合硅胶（Cg）和苯基键合硅胶等。
正相色谱柱+亲水作用色谱：用硅胶填充剂或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常见的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等，在使用正相体系时，一般都采用弱极性的溶剂作为流动相。此类极性固定相如硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等也可使用含水的流动相，此时化合物的保留随着流动相中水的比例增加而减弱，这种分离模式称为亲水作用液相色谱(hydrophilic interaction liquid chromatography, HILIC)。目前，正相色谱分析最常用的是氨基柱和氰基柱。
离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。


阴/阳离子交换色谱柱（negion/cation exchange"column)
阴/阳离子交换柱属于强离子交换柱，分为玻璃柱与不锈钢柱，多用不锈钢柱。阳离子交换柱填充硅胶基质，键合强阳离子基团，含有磺酸盐功能团，属于酸性离子柱，特别设计用于常规HPLC分析有机和无机阳离子。阴离子交换柱填充硅胶基质，键合强阴离子基团，含有季胺碱功能团，属于碱性离子柱
手性拆分色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。
在中国药典分类所述的各类色谱柱中，反相色谱柱是应用最广泛、最常见的一种。
手性色谱柱（Chiral HPLC Column）是由具有光学活性的单体，键合在硅胶或其它聚合物上制成手性固定相（Chiral Stationary Phase）。通过引入手性环境使对映异构体间呈现物理特征的差异，从而达到光学异构体分离的目的。主要有刷（Brush）型或称为Prikle型、纤维素型等
二维色谱
另外，当样品组分非常复杂时，使用一种分离模式进行分离变得非常困难，多维色谱应运而生。多维色谱又称为色谱/色谱联用技术，是采用匹配的接口将不同分离性能或特点的色谱连接起来，第1级色谱中未分离开或需要分离富集的组分由接口转移到第2级色谱中，第2级色谱仍需进一步分离或分离富集的组分，也可以继续通过接口转移到第3级色谱中。实际上，一般选用2个合适的色谱联用就可以满足对绝大多数难分离混合物样品的分离或富集要求。因此，通常的色谱/色谱联用都是指二维色谱。
若2种色谱的联用仅是通过接口将前一级色谱中某一（些）组分传递到后一级色谱中继续分离，这是中心切割式二维色谱(heart-cutting mode two-dimensional chromatography),一般用C+C表示。
但当2种色谱联用，接口将前一级色谱中的全部组分连续地传递到后一级色谱中进行分离，这种二维色谱称为全二维色谱（comprehensive two-dimensionalchromatography),一般用CxC表示。
C+C或CxC2种二维色谱可以是相同的分离模式和类型，也可以是不同的分离模式和类型。
化学键合相（键合相）
用化学反应的方法将固定液的官能团键合在载体的表面上，所形成的填料称为化学键合相，简称键合相。一般的化学键合相用硅胶为载体，具有分配作用及一定的吸附作用。吸附作用的大小，视键合覆盖率而定。用化学反应方法将载体表面上残存的硅醇基除去，称为封尾、封顶或遮盖，所形成键合相称为封尾键合相。完全封尾的键合相没有吸附作用，但强疏水是其缺点。
比表面积：填料颗粒的比表面积决定样品容量。颗粒外表面和内部孔表面的总和
有机和无机杂化颗粒填料：有机-无机复合基质填料是由无机材料表面包覆有机聚合物构成，无机材料经过聚合物包覆后，其表面可以很好的被屏蔽，从而避免了无机材料与溶质的相互作用，同时包覆的聚合物又可以发挥其耐酸碱的特性，因此有机-无机复合型填料结合了无机材料的高效性，优良的机械强度以及有机材料的化学稳定性等优势于一身。
VanDeemter曲线及方程




分离度